V Assassin Creed: Brotherhood se Ezio přesune do Říma, kde musí se svou skupinou hassassínov zaútočit na představitelů zkorumpovaných Templářů. V Eziovov arzenálu nebude přitom chybět protetická ruka, dýka, jedem naplněná stříkačka, vějíř, lopatka vrtule, sekera, nebo dvě dýky najednou.

A poprvé v sérii se můžete těšit na multiplayer, ve kterém si můžete zahrát i za templářů nebo v Abstergu se vytrénovat na vraha s vlastním způsobem zabíjení.